采用两步超滤法对出芽短梗霉发酵产生的聚苹果酸进行分离与提取。发酵液经离心去除菌体后，先采用截留分子量为30KDa的超滤膜除去多糖及大分子杂质，接着采用截留分子量为1KDa的超滤膜对料液进行浓缩并除去小分子杂质，浓缩液经有机溶剂沉淀和冷冻干燥获得聚苹果酸。采取单因素实验法优化了超滤条件，结果表明：离心除菌后的发酵上清液稀释4倍，跨膜压差0.075MPa，控制料液pH 6、温度35 ℃，使用30KDa超滤膜稀释超滤1次，1KDa浓缩4倍后，经甲醇沉淀和冷冻干燥，PMLA的纯度达到82.3%，PMLA的提取收率为57.56%。

In this study, a two-step ultrafiltration was applied to separate and concentrate PMLA from fermentation broth. Membranes with MWCO of 30 kDa and 1 kDa were feasible for separating PMLA from Pullulan and concentration, respectively. The best operational conditions of 30kDa membrane were as follows: transmembrane pressure 0.075MPa, dilution factor of 4, volume reduction ratio of 8, times of dilution diafiltration 1. The concentration factor of 1 kDa membrane was 4. At the optimal conditions, the purity of PMLA increased to 82.3%, and the recovery rate was 57.56%.

[1] 李睿颖, 许勤虎, 刘晓鸥等. 聚苹果酸及其衍生物的研究与发展[J]. 食品工程，2009，(2)： 6～9.
[2] 程若东, 王 浩, 周 华等. 出芽短梗霉积累聚苹果酸途径及调控研究[J]. 化工学报，2012，(63)：3639～3644.
[3] 王 浩, 郑谊丰, 程媛媛, 离子交换法从发酵液中提取聚苹果酸[J]. 离子交换与吸附，2011，27(3)：257～263.
[4] 乔长晟, 王凤荣, 蒋 磊等. 一种酶法去除普鲁兰多糖提取获得β-聚苹果酸的方法. 中国. CN 101560528A. 2009年5月21日.
[5] 宋存江, 孙村民, 马晨燕等. 同时获得副产物普鲁兰β-聚苹果酸的制备方法. 中国. CN 101100687A. 2008年1月9日.
[6] K. Keller, T. Friedmann, X. Boxman, The bioseparation needs for tomorrow[J]. Trends Biotechnol. 19 (2001) 438–441.
[7] M.H.M. Isa,D.E. Coraglia, R.A, et al. Recovery and purification of surfactin from fermentation broth by a two-step ultrafiltration process[J]. Membr. Sci. 296 (2007) 51–57.
[8] H.L. Chen, Y.S. Chen, R.S. Juang, Separation of surfactin from fermentation broths by acid precipitation and two-stage dead-end ultrafiltration processes[J]. Membr. Sci. 299 (2007) 114–121.
[9] 周义卉, 高学玲, 张斌等. 超滤膜澄清分离速溶茶副产品中茶多酚的研究[J]. 膜科学与技术. 2012, 32(1), 102-105.
[10] 郑谊丰, 周 华, 王丽燕等. 高效液相色谱法测定发酵液中聚苹果酸方法的建立[J]. 食品科技. 2010, 35(4), 243~246.
[11] 郑谊丰. 发酵液中聚苹果酸的分离提取[D]. 南京工业大学. 2010.
[12] 邓长江, 李长清, 朱希强等. 蒽酮-硫酸法测定出芽短梗霉发酵液残糖和总糖含量的研究 [J]. 食品与药品, 2006, 8(11): 54-56.